精选答疑 | 如何做好无菌生产过程中的空气微生物监测-医疗器械网

在《如何做好无菌生产过程中的空气微生物监测》网络研讨会直播期间，我们陆续收集到了参会听众针对该主题所提出的常见问题。根据以下这些问题，三位嘉宾讲师分别为您答疑解惑。

秦老师，请问无菌生产线，B级背景下A级浮游菌采样，使用在线浮游菌采样，应该如何规定采样次数和采样时间点呢？或者如何采样更合理呢？

欧盟GMP附录1对于A级区的活性粒子监测要求是连续性监测，必须实现连续性监测全覆盖。浮游菌、沉降菌的监测需要基于风险评估来确定，根据情况来确定。浮游菌的监测，可获得更具代表性的、更高质量的监测数据，应进行连续的监测：无菌生产从准备阶段到整个生产过程进行持续监测，就是全过程的监测，而中间过程或换碟次数等是基于技术特点来选择确定的，同时也要考虑降低干预频率的问题。采样时间点也是全覆盖。

秦老师，请问应该如何降低在无菌生产线更换培养皿时的污染风险？

这里的更换培养皿我理解是浮游菌监测过程中的。首先强调在A级区的干预动作一定不要太快，控制动作幅度。换碟的时候，动作要准确、缓慢，保证不会扰动A级层流，然后换碟的时候，打开常规平皿盖子、上封盖放在一边，再放不锈钢头等等，有这样的一系列操作，在打开培养皿的时候带橡胶手套操作比较困难，这个时候务必注意一点，因为培养皿比较薄，换的时候可能会碰到里面的琼脂，甚至可能会掉落。这种情况对于经过培训的、经验丰富的来说，比较少发生，但是对于新手或者夜班疲劳的时候，尤其是更要注意这些点。更换培养皿之后，要把采样完的碟放在一起，请注意，不要碰倒，或放在单独的一个区域。每次换碟之间，建议对不锈钢底座进行擦拭消毒，防止交叉污染。如果采用BCSU方案，由于是一次性系统和创新设计，没有擦拭消毒底座这一说，不用担心跌落或碰到内部培养基，取样换碟操作也更加简单。

秦老师，依据国内外法规，对检验用无菌隔离器内部环境监测频次要求（如浮游菌），是否需要贯穿整个无菌检查？

国内外法规没有强制A级区连续监测一定要使用浮游菌采样这样的监测方式，欧盟无菌附录一讲浮游菌采样、沉降菌采样都可以，只要保证连续就可以。浮游菌采样与沉降碟的采样选择是要经过风险评估的，什么点位、什么时候、适合什么样的采样方式，要经过评估来最终决定。总之，不管采用什么方式，连续监测是必须保证的。无菌操作过程的持续改善需要更可靠的数据，浮游菌这种主动式的采样肯定优于沉降菌这种被动式的采样，提供的数据更能够反映出实际的空气质量情况，更具代表性，监测结果更有说服力，无菌检测全过程监测优先选择浮游菌方式。问题是传统浮游菌采样单片碟采样时间比较短，无法单片全覆盖，如果可以实现单片采样更长时间到3-4小时，那么在isolater里使用浮游菌采样是最优方案。

谭老师，请问在无菌实验室C级背景下的安全柜之类的可以用计量代替验证吗？

对于无菌来说，背景要求不是很高，生物安全柜是半开放式的，在C级背景下，不密闭，对检验结果有一定的风险，在这种情况下如不做完整的I、O、PQ，只做计量（风速、悬浮粒子、负压等的计量）证明检测装置是完好的，数据是准确的。但是，不做完整的I、OQ的情况下，C级背景下生物安全柜整体效能是没证据的，所以无菌实验室保证检验的准确性还是应做生物安全柜的完整的3Q。当然如果不做，无非就是出现假阳性的概率高，检品假阳性的概率高的情况下，产品最后不予放行、报废的可能性升高，节省的验证成本不能弥补一批产品的价值，因小失大。

谭老师，请问在无菌生产线，如果在线粒子监测系统发现设备出现故障，此刻仍需继续生产，但之后的生产没有监测数据应该怎么处理？

粒子监测发生故障的时候，生产应暂停。要么排除故障，要么有替代的监测方法。如果既不停产，从故障到生产完成一直都没粒子监测的数据，那么就要看沉降菌、浮游菌、包括层流的风速来佐证无菌保证。粒子监测一旦没有数据，这种故障是持续的，还继续生产，又没监测数据，放行的困难是非常大的，因为不能证明所有的无菌保证要素，所有的关于粒子污染得到有效控制，这批产品关于粒子污染没有什么可证明的，即使做一些微粒的检测，也不具有代表性，微粒的污染和微生物的污染是一样的，都不具有均一性，所以在这种情况下没有可证明的证据，粒子的污染没有证据的情况下，这批产品是没办法放行的。问题问的是应急措施，就是要把正在暴露的产品、包材进行清除，尽可能恢复。为了减少问题，如果粒子监测故障频发，建议寻找稳定性、耐用性比较好、故障率低的粒子监测的设备，要么，在同一个监测点上布两个，一个备用的，两个同时坏的概率非常低。如题所讲，不建议这批产品放行。

谭老师，请问在A级B级不生产的情况下，多长时间环境检测一次？

不生产是静态环境。静态环境的维持首先需不需要静态的监测，国内外的法规规范、技术要求来看，静态监测不是重要的，产品生产动态暴露的风险，A、B级在静态条件下是不是能保持符合A、B级静态标准，是在级别确认时做的一件事，可制定相关监测规程、监测计划，按照监测计划，定期进行测试。第二种，静态最长时间不生产做到一周，空调24小时运行，可以做极限挑战，开始连续3天，后面每3天到每5天，做环境挑战性测试，看静态环境能保持多长时间，类似GMP要求的清洁效期的概念：生产完之后，清场清洁、消毒灭菌完成后，空调24小时正常运行的情况下，可以挺多长时间。A、B级极限时间的保持验证，在持续的静态保持时限内可以不进行环境监测。这种验证频次要高一点，毕竟是A、B级，每年2次、最多3次，来收集数据，证明环境持续保持的时限是有效的，用定期的低频次的验证来代替持续静态监测。

叶老师，请问洁净实验室C级区及C级下的超净台，在不经常用的情况下(1-2个月使用一次)，是否可以不按照法规规定监测沉降菌的频率监测，而在每次使用前做监测，合格后再投入使用呢？

做环境监测的目的1、证明空调系统或设备始终能提供一个满足标准要求的洁净环境，日常监测的目的；2、监测关键的操作是否产生风险。C级的超净工作台不经常使用、停掉，没有做环境监测的意义。可以在使用前监测，等结果合格了使用是没问题的。不仅凭借沉降菌数据，还要考虑粒子、浮游菌、表面微生物监测，来证明工作台满足要求。法规没规定沉降菌监测频次，只对A、B级区要求生产过程全过程监测。

叶老师，请问A级和B级建议用什么类型的消毒剂？

首先应该是无菌消毒剂，可以考虑预制式的或者自己除菌过滤；第二，考虑消毒剂的残留，醇类比较低，酚类、季铵盐类都可以使用，使用区域不一样。和产品直接接触的设备不建议用新洁而灭，有残留。

秦老师，请问浮游菌和沉降菌的监测频率是否一样？做验证时都必须一起做吗？

A、B级：监测频率：A级连续监测；B级考虑与A级类似的方案。浮游菌和沉降碟采用时需保证连续监测，以及监测结果的客观性、代表性和是否更有说服力，浮游菌连续监测更优，条件允许，可以取代沉降碟。做验证的这个描述不是很清晰，浮游菌实现了连续监测的话，可以省去沉降碟的。C、D级：根据实际情况进行风险评估定监测频率、选择哪种监测。

叶老师，请问在做自净时间和空调最长停机时间验证时需要做沉降菌浮游菌监测吗？

做自净时间的目的是衡量空调系统性能，如区域被污染了，空调能在20分钟之内，能让房间恢复至正常级别。级别是由粒子数来定的，不考虑微生物，微生物通过自净不能去除。所以，自净时间不做沉降菌、浮游菌监测。空调最长停机时间验证不应该做。停机再恢复唯一的考虑是重新清洁消毒，相应的环境监测，证明恢复到预期的级别。CFDI中有相关问答。

谭老师，请问沉降菌和表面微生物哪个先做比较好？有影响吗？

A级的动态监测下，过程中监测沉降菌，生产结束、末尾，清洁清场仍处于动态情况下，但没暴露的产品时做表面微生物监测比较好。所以，沉降菌是持续监测，表面微生物在生产的结束、到末端没产品暴露的情况下，用接触皿法。清洁清场之前或初期来做表面微生物证明本批产品生产过程中，表面微生物也是有效的。表面微生物有累积过程，做了一次环境消毒或灭菌之后，重新开始动态生产过程中，无论层流还是紊流，表面吸附微粒、气溶胶类物质有一个累积，所以最后做表面微生物，代表性最好。如果证明最后表面附着的微生物仍然符合标准，即最差条件符合。所以先做沉降菌后做表面微生物。

叶老师，请问在线浮游菌检测如果不是全程检测，只是在生产过程中监测，应该怎么写评估报告？CNC区域需要检测吗？

并不是说在线监测就是在线浮游菌监测，取决于每个公司、基于风险选择合适的取样点、取样计划。不需写评估报告，定好取样计划去执行，数据没超标、符合要求即可。CNC区域依据自己公司定的污染控制策略来做。

叶老师，请问特殊区域（如洁净冷库（2～8℃），低湿区域（相对湿度≤30%））如何进行动态监测？

环境对监测效果的影响，特殊的皿在极端环境里用于监测。特殊区域的评估，频次宽泛点、风险不高，低温不利于微生物长出，可以考虑浮游菌监测。

叶老师，请问a级层流里该如何布点？一般几个点合适？无法达到14个。

层流参考ISO14644悬浮粒子的布点要求。日常依据风险评估布点。

谭老师，请问封闭式隔离器的静态悬浮粒子监测是否可以使用在线粒子设备来做？因为离线的粒子机器不方便放置到里面，是否有法规或指南可以进行相关参考？

隔离器静态悬浮粒子测试一般是在做设备确认的时候做的，在确认的时候只用在线的监测设备，存在布点的问题。在确认的时候布点相对来说是比较多的、要求具有普遍的代表性、还要在关键的位置布点。有那么多在线设备吗？如有，都使用在线的也不是不可以；但没有那么多，在线粒子监测设备自带的，只有1处或2处，代表性不好的话，怎么用数据来评估确认的成败呢？很难去评估。离线的消毒灭菌后，通过手套箱来操作、不开门、先布进去，可能更好。如果布点有代表性，全部用在线监测设备，那就更好了。

谭老师，请问C级背景下的A级有在线粒子监测，但是设备无追溯、打印系统，只能在记录上手写登记灌装开始数量、灌装中间过程、灌装结束时的读数，能否符合审计要求，或能否有更好的措施？

C级背景下的A级应该是最终可灭菌的无菌制剂，比无菌灌装产品的风险小很多。如果是小容量或大容量的注射剂有不溶性微粒相关的监测，所以微粒的污染还是比较重要的。要看在线粒子监测是否有报警功能，如有，手工记录可接受；如在线粒子监测装置上无报警功能，全凭间歇式人为观察进行记录，不是真正意义上的连续监测，违反原则性要求，应更换成带有在线记录功能的设备。

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