食品中乳铁蛋白测定的整体解决方案 ——CNW 肝素亲和柱升级款新品来袭
乳铁蛋白是近几年开发研究速度最快的营养添加剂之一，不仅具有广谱抗菌，抗病毒感染作用，还能调节体内铁平衡、调解骨髓细胞的生成等。乳铁蛋白在国内外食品加工中的应用日益广泛，故有关乳铁蛋白的安全生产和使用是需要重点关注的问题。
基于 T/TDSTIA 006-2019 奶及奶制品中乳铁蛋白的检测 - 液相色谱法，使用 CNW肝素亲和柱（SBEQ-CC65001）进行前处理测定了牛奶和婴儿配方奶粉中乳铁蛋白。实验结果发现回收率达到 90% 且稳定，表明该方法结合 CNW 肝素亲和柱测定食品中乳铁蛋白方法可靠，效果佳。
一、前处理操作
溶液配置：
① 磷酸盐缓冲液Ⅰ（提取液）：称取磷酸氢二钠（CAS: 7558-79-4）23.85 g，磷酸二氢钠（CAS: 7558-80-7）4.99 g，加适量水溶解， 用 10 M 氢氧化钠溶液调节 pH 至 7.50，定容至 1 L，混匀。
② 磷酸盐缓冲液Ⅱ（活化液）：称取磷酸氢二钠 5.96 g，磷酸二氢钠 0.96 g，氯化钠（CAS: 7647-14-5）5.84 g，加适量水溶解， 用 10M 氢氧化钠溶液调节 pH 至 7.50，定容至 1 L，混匀。
③ 磷酸盐缓冲液Ⅲ（洗脱液）：称取磷酸氢二钠 5.96 g， 磷酸二氢钠 2.50 g， 氯化钠 119.30 g， 加适量水溶解，用氢氧化钠溶液（4.1）调节 pH 至 7.50，定容至 1 L，混匀。
样品前处理：参照 TTDSTIA 006-2019
牛奶基质：称取 10 g 牛奶到 50 mL 离心管，加标后，加入磷酸盐缓冲液Ⅰ定容至 50 mL，混匀，离心 15 min，吸 取 25 mL 中间层试液于另一 50 mL 离 心管中，5000 r/min 离心 15 min，吸取上清液，待净化。
婴配奶粉：称取 5.00 g 样品到 50 mL 离心管，加标后，加入磷酸盐缓冲液Ⅰ定容至 50 mL，混匀，离心 15 min， 吸取 25 mL 中间层试液于另一 50 mL 离 心管中，5000 r/min 离心 15 min，吸取上清液，待净化。
SPE操作：
活化平衡：10 mL 磷酸盐缓冲液Ⅱ;
上样：10 mL 上清液（1d/2s）；
淋洗：10 mL 磷酸盐缓冲液Ⅱ,排干；
洗脱：4.5 mL 磷酸盐缓冲液Ⅲ（1d/2s），排干，收集全部洗脱液；
定容：磷酸盐缓冲液Ⅲ定容至 5 mL 混合，过 0.22μm 滤器后，进样，待 HPLC/UV 检测。
注意事项：
① 上样要注意控制流速，流速过快可能造成 10%-15% 左右损失；
② 进样前的针式滤器，推荐采用亲水 PVDF 滤器、亲水 PTFE 滤器及水相聚醚砜针式滤器进行过滤，不推荐尼龙针式滤器，可能造成 40%~60% 的损失。
二、仪器条件
a) 色谱柱：AthenaC4，4.6*150mm，5μm，300?（LAEQ-461579）
b) 流速：1 mL/min
c) 波长：280 nm
d) 进样量：30μL
e) 流动相：A. 0.1% 三氟乙酸溶液；B. 乙腈溶液。梯度洗脱程序见表 1。
三、实验图谱
图 1 牛奶基质加标（250 μg/g）乳铁蛋白谱图
图 2 婴配奶粉基质加标（500 μg/g）乳铁蛋白谱图
四、实验数据
五、推荐产品
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