核酸杂交小帮手-Biodyne尼龙膜的选择及应用-医疗器械网

核酸杂交小帮手-Biodyne尼龙膜的选择及应用

来源：Cytiva（思拓凡）分类：科技文献 2024-04-07 10:30:08 59阅读次数

尼龙膜是一种与生命科学相关行业相关的重要应用材料，其吸附力强，有较强的抗张强度和优良的耐热性能，并可耐受有机溶剂如酮、酚、醚及高分子量的醇类物质，具有高稳定性和耐腐蚀性。此外，由于尼龙膜本身的高透明度和低自发荧光的特性，可提供清晰的信号强度和准确的实验结果，因而尼龙膜在基因分析、蛋白质研究、细胞培养、诊断以及生物传感器等生命科学应用领域具有广泛的应用潜力。

可提供用于生物分子检测的诊断尼龙膜Biodyne nylon 6,6，灵敏度高、本底低并具有高度的批间一致性，天然亲水，易于润湿。当用于多次的杂交，洗脱和重新杂交时，Biodyne尼龙膜仍能保持较高的稳定性，不会发生皱缩，开裂或撕裂。此外，Biodyne尼龙膜能达到严格的分子生物学应用的标准，如法医学检测，可广泛应用于核酸杂交，共价配体固定化以及斑点杂交等各种核酸应用。

Biodyne尼龙膜，不同化学表面，适配不同应用实验

根据不同的实验应用方向，Biodyne尼龙膜可提供五种经γ射线灭菌的不同化学表面。

Biodyne A膜是一种不带电的尼龙6,6膜。它具有对生物分子高结合容量，提供高度敏感的核酸的截留。特别适用于化学发光检测系统或者存在本底问题的系统，如核酸印迹，基因探针检测，DNA指纹识别。

Biodyne B膜的多孔表面分布着高密度的四铵基基团，带有正电。Biodyne B膜在核酸检测应用中具有高灵敏，这种膜的结合机制是通过静电相互作用，并且可以在较宽的pH (3-10) 范围内保持核酸的离子结合力，从而能实现快速核酸转移等相关应用。除此之外，这一强的结合力使膜适合于长时间的转移过程，且无核酸从膜上扩散的风险。Biodyne B膜适于高敏感的检测，如核酸印迹、DNA指纹识别和菌落/菌斑转移。

Biodyne Plus膜类似Biodyne B膜，是具有高等电点的带正电荷的尼龙6,6，也含有分布有高密度的四级铵基基团的多孔表面。这种膜具有极高的等电点，在某些非放射性检测实验中拥有比Biodyne A更高的灵敏度，同时相较于Biodyne B膜而言本底更低，适用于核酸印迹和DNA指纹分析。

Biodyne C膜是一种带负电的具有分布有高密度羧基基团的多孔表面的膜。这种膜的结合机制是通过静电相互作用，应用范围包括蛋白固定，ELISA，亲和纯化，反向点杂交。

Immunodyne ABC膜是改性的尼龙膜，这种膜通过专利化学方法进行表面改性，可实现共价结合和稳定的配体固定。膜经过预活化，可与蛋白质和其他生物大分子上的亲核基团形成共价键。在中性pH值下，主要与胺基团发生反应。Immunodyne ABC膜本身具有亲水性，在与低离子强度的水溶液接触时可立即润湿，无需使用表面改性润湿剂，与配体溶液接触前无需预湿。与传统的无孔固相表面相比，这种膜具有更强的蛋白质结合能力。

Biodyne nylon 6,6实验性能测试

带正电尼龙6,6膜上检测到32P标记的基因组条带。

图1：用甲基化酶稀释液消化人DNA，凝胶的每条泳道内分别加入500至25 ng样品进行电泳，后转移到带正电的尼龙膜上 (Biodyne B) ，根据FBI推荐，将膜与32P标记的D1S7探针进行杂交，24 h的放射显影谱显示，可检测到低至25 ng的总DNA。

带正电尼龙6,6膜可经多轮转移和探针检测。

图2：Lambda-Hind III片段经凝胶电泳分离后转移到带正电尼龙 (Biodyne B) 膜上，条带完全被剥离后，用探针标记检测，重复4次，信号强度均未见损失。条带由化学发光检测系统检测。1A-4A：探针标记后的印迹；1B-4B：条带被剥离后，探针标记前的印迹。

化学荧光检测到带正电（高等电点）尼龙膜上的斑点杂交。

用Matrix Platemate robot将Lambda Hind III DNA点阵于Biodyne Plus膜上，每个斑点20 nL，每个浓度点阵2列。膜与DIG标记的Lambda DNA进行杂交，用碱性磷酸酶标记的抗DIG抗体进行检测，化学荧光底物加入后30 min，用Storm扫描膜显色结果。