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继续话谈【国自然热点】线粒体之抗体鉴定

来源：赛默飞世尔科技生命科学产品分类：商机 2024-03-28 10:15:08 0阅读次数

作为生命的能量工厂，线粒体是当之无愧的小身材大能量。继上期我们谈到线粒体在健康和疾病中发挥重要的作用，不仅提供生命活动的能量，也参与细胞任务，如信号传导、分化、凋亡以及细胞周期和生长的控制。如此重要的角色当然少不了分析和鉴定。

线粒体抗体检测线粒体特异靶点，可以帮助研究线粒体的形态和动力学，阐明以线粒体为中心或受线粒体影响的许多生理或病理现象。Invitrogen丰富的线粒体抗体能帮助可靠地检测关键的线粒体靶标。每种抗体都经过严格的验证，可用于各种应用。下面列举常见的线粒体标记靶点。

细胞色素C氧化酶（Cytochrome C oxidase,COX）

线粒体内膜上的一组酶复合体，又称呼吸链，能进行电子传递最终产生H2O和ATP。细胞色素C氧化酶是线粒体呼吸链的最后一个复合酶，能催化细胞色素C的氧化。COX缺陷是线粒体疾病比较常见的缺陷，其特异活性降低可表现为不同程度的严重性，如COX缺陷可引发线粒体应激信号，从而促进细胞核中肿瘤发展基因表达，导致细胞癌变。

使用 COX Ⅳ单克隆抗体 (货号 # MA515078) 对HeLa细胞进行免疫荧光分析。红色为肌动蛋白，绿色表示COX Ⅳ蛋白。

ATP合酶

ATP合酶又称F0F1复合物，头部F1由5种多肽（α、β、γ、δ和ε）组成，基部由三种多肽组成，该酶在分离状态下具有ATP水解酶的活性，在结合状态下具有ATP合酶的活性。结合状态下能催化ADP产生ATP，它们共同参与线粒体内ATP合成链的组装和稳定，确保细胞高效产生ATP。

免疫荧光分析牛肺动脉内皮细胞的线粒体。使用Zenon?Alexa Fluor?555标记试剂盒标记氢离子转运ATP酶线粒体F1复合体α链单克隆抗体（货号#459240），Zenon?Alexa Fluor?488（货号Z-25202）标记微管蛋白。

使用ATP1B1单克隆抗体（货号#MA3930）标记MCF-7细胞的ATP1B1蛋白，后续使用Dylight 488荧光二抗（货号#35503）标记。右边为对照，红色为F-actin，左图绿色表示ATP1B1蛋白。

TOM20

线粒体外膜前蛋白转位酶(Tom)是一种多亚基蛋白复合物，促进核编码的前体蛋白进入线粒体，参与线粒体的膜电位维持和物质的运输。Tom20是其中重要的组成部分，位于线粒体外膜，因表达稳定常作为线粒体内参蛋白。

使用 TOM20 单克隆抗体(货号 # MA534964) 对HeLa细胞系进行免疫荧光分析。左边红色表示TOM20，右图绿色为Tubulin。

电压依赖性阴离子通道VDAC

位于线粒体外膜的膜蛋白，是一类孔蛋白。调控阴、阳离子以及代谢物进出线粒体，是线粒体对外交流的关键通道，对线粒体和胞质之间的能量代谢和物质交换发挥重要的作用。其结构和功能改变会导致治病的发生。另外，因其相对保守，也可作为线粒体的内参蛋白。

使用 VDAC 多克隆抗体(货号 # PA1-954A) 对U-251细胞系进行免疫荧光分析。左边为对照，红色为F-actin，右图绿色表示VDAC蛋白。

线粒体内膜蛋白（Mitofilin）

Mitofilin是与多种线粒体蛋白相互作用的一种线粒体内膜蛋白，位于线粒体内膜，参与线粒体内膜嵴形态维持、线粒体内蛋白的转运过程等。研究表明，在多种疾病中Mitofilin异常表达，影响线粒体结构的完整性和功能的障碍，导致疾病的发生。

基因敲除策略验证抗体特异性。siRNA干扰HeLa细胞经表达Mitofilin，后用Mitofilin单克隆抗体（货号#45-6400）检测。

WB结果显示，实验组没有信号，而对照组目标条带明显，说明该抗体特异性较好。

热休克蛋白60（heat shock protein60，HSP60）

热休克蛋白是从细菌到哺乳动物中广泛存在的一类热应激蛋白。HSP60对于线粒体内蛋白的转运、折叠具有重要作用，是线粒体的一个关键标志物。HSP60失活会影响线粒体的关键功能，降低细胞的呼吸能力和ATP水平。据研究发现， HSP60丢失而引发纹状体神经元线粒体障碍被认为是神经退行性疾病亨廷顿舞蹈症发生的重要原因。