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元气细胞 | 一文看懂流式检测细胞活性

来源：赛默飞世尔科技生命科学产品分类：选购指南 2024-05-28 09:45:14 0阅读次数

在免疫学研究中，流式细胞术是重要的实验方法。它能够从单细胞水平同时分析细胞样本中的基因表达和蛋白表达，还可以检测细胞活性、细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡等细胞功能。尤其是，流式细胞术可以确定活细胞数量，并区分活细胞与死细胞，从而提高实验结果和分析的准确性。无论是在药物筛选、细胞培养，还是疾病模型研究中，流式细胞术的细胞活性检测都是确保精确和可靠结果的关键步骤。

传统的流式细胞死活染料为细胞膜非通透性的核酸染料，例如PI、7-AAD、DAPI。这类核酸染料能穿过死细胞的细胞膜，结合核酸后发出荧光，而无法穿过活细胞的细胞膜。但是，如果实验涉及到胞内染色，细胞需要固定破膜；这时使用核酸染料会染色所有细胞，但可固定的细胞活性染料可以来区分。

现在，流式检测细胞活性试剂盒主要有四类：可固定细胞活性染料、非可固定细胞活性染料（如PI和7-AAD）、细菌活性检测及酵母活性检测。可固定细胞活性染料有两种，Molecular Probe LIVE/DEAD Fixable活性染料和eBioscience FVD eFluor活性染料。非可固定染料即核酸染料，不仅包含了PI和7-AAD，还有SYTOX DNA非可固定细胞活性染料。在本文中，我们将详细介绍LIVE/DEAD和FVD eFluor两大精品！

1. 可固定细胞活性染料

理想中的流式检测细胞活性试剂盒该是什么样？

质量稳定——可以清晰地区分活细胞和死细胞；即使在细胞固定后，样本仍然可用。
方便百搭——可以适用到现在在用的所有流式免疫分型实验中。

如果想要更好，它还可以有什么特点？

众多选择——很多不同的细胞活性检测染料，从紫外光到红外光的通道都可以放。
独特光谱——还可以适用到光谱流式细胞仪上，自由地设计30色50色Panel。

现在赛家可固定细胞活性染料流式检测是基于荧光染料与胺这种细胞蛋白相反应的实验原理。荧光染料不能穿过活细胞的细胞膜，仅有细胞膜表面的蛋白与荧光染料发生反应，表现微弱染色（图1，活细胞）。但这些荧光染料可以穿过受损的死细胞细胞膜，并对细胞内外的胺蛋白染色，从而表现十分明亮的染色（图1，死细胞）。

图1. 可固定细胞活性染料（含LIVE/DEAD和FVD eFluor）原理。非细胞透过性的胺反应染料仅能结合到活细胞的细胞表面，产生非常微弱的荧光。这些染料可以透过死细胞的细胞膜，并与细胞内部的胺蛋白结合，产生极强的荧光。

图 2. 不同 LIVE/DEAD 荧光染料染色的Jurkat细胞直方图。死细胞群是由热处理产生的。细胞样品用LIVE/DEAD Fixable细胞检测试剂盒染色 20 分钟。

在Dr.赛流式小课堂中

我们一起了解过流式可固定活性染料

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2. 可固定活性染料选择指南

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3. ArC 胺反应补偿微球

在使用LIVE/DEAD或FVD这些胺反应荧光染料时，建议同时使用Invitrogen ArC胺反应补偿微球（货号：A10346）。它是基于Fixable荧光染料研发而来，无需对细胞热处理，实验步骤轻松又简单，实验结果准确且一致。尤其适用于珍贵而稀少的样本。

图3. ArC 补偿微球与LIVE/DEAD Fixable Violet 细胞活性检测试剂盒 (货号 V34955) 共同染色，并通过流式进行分析。使用 LIVE/DEAD Fixable Violet 荧光染料与ArC 补偿微球中的阳性和阴性微球共同进行染色、清洗，并使用有 405/7nm 激光和 450/50 nm 检测通道的流式细胞仪进行分析。结果显示清晰、分群明显的正峰和负峰。

在最后

在最后，值得提醒的是流式Panel配色很难又复杂。为流式Panel选择合适的LIVE/DEAD或FVD eFluor荧光染料，需要考虑很多因素，包括流式仪器配置、抗体荧光以及荧光溢漏。在这里，推荐各位联系赛默飞科学家，拨打400-820-8982，一起选择便宜又好用的荧光染料。

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活动时间：2024.5.27-2024.6.9

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流式细胞活性检测故事

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流式细胞术是重要的细胞分析方法学，赛默飞世尔科技的Gibco、Invitrogen和Thermo Scientific产品品牌可提供从流式仪器到抗体和试剂的流式整体解决方案。其中Invitrogen eBioscience陪伴着每一代流式科学家和技术人员获得成果、共同成长，这些年来我们一起见证以Anti-FoxP3为代表的流式抗体深受喜爱、更多种类的流式荧光染料欣然上市以及现在有着更丰富的产品和工具，满足高校研究院、生物技术公司、药企等从早期基础研究到临床转化和生产等不同阶段的需求，加速生命科学行业的进程发展。