磺胺类药物是应用最早的一类人工合成抗菌药物，具有抗菌谱广、疗效强、方便安全等优点，在水产养殖中应用非常广泛，但是磺胺类药物可通过食物链在人体内蓄积，导致细菌产生抗药性，危害人体健康，引起排尿和造血紊乱等不良后果。为了消费者健康，严格监控动物源性食品中的药物残留至关重要，为此需要可靠的分析方法来监测这些药物残留。

本实验参考标准《农业部958号公告-12-2007 水产品中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-紫外检测法》，使用EZsep?HLB固相萃取柱净化样品，高效液相色谱进行检测，建立了水产中磺胺类药物残留量的分析方法。

关键词

水产；磺胺类；兽药残留；EZsep?HLB

1.1 仪器与试剂

MPREP-SPE08固相萃取装置，货号：PZ0008，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

EZsep?HLB固相萃取柱（150mg/6mL），货号：PZ12603，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

E.T.氮吹浓缩仪，货号：C020017，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

MVP全自动高通量真空平行浓缩仪，北京莱伯泰科仪器股份有限公司；

LC-20AD液相色谱仪，岛津企业管理（中国）有限公司；

冷冻离心机，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科学仪器厂；

甲醇（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

乙腈（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

正己烷（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

乙酸乙酯（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

乙酸（分析纯），购自国药集团化学试剂有限公司；

无水硫酸钠（分析纯），购自国药集团化学试剂有限公司，经450℃灼烧4h，置于干燥器内备用；

甲醇中14种磺胺类药物混标，100μg/mL，坛墨质检科技股份有限公司。

1.2 工作液配制

取甲醇中14种磺胺类药物混标溶液1.0mL，用甲醇稀释至10mL容量瓶中，配制成浓度为10μg/mL的磺胺类药物混标中间液。

分别移取10μg/mL的磺胺类药物混标中间液0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mL用流动相稀释至10mL容量瓶中，得到浓度分别为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0μg/mL的标准工作溶液。

1.3 实验部分

准确称取鱼肉试样5.0g，置于50mL具塞离心管中，先加入25mL乙酸乙酯，均质1min，然后加入5g无水硫酸钠，旋涡混匀1min，超声提取1min，8000r/min冷冻离心10min，将乙酸乙酯层移到200mL浓缩杯中。再向原离心管中加人25mL乙酸乙酯，旋涡混匀1min，8000r/min冷冻离心10min，将乙酸乙酯层合并于200mL浓缩杯中，于30℃水浴中减压浓缩至近干。先用1mL甲醇溶解上述残渣，再加入2mL1%乙酸溶液，涡旋混匀，超声1min，转移到新的50mL离心管中，再向浓缩杯中加人1mL甲醇和2mL1%乙酸溶液，涡旋混匀，超声1min，转移合并于50mL离心管中。向离心管中加人8mL正已烷，涡旋混匀，8000r/min冷冻离心5min，弃上层正已烷层，再加入8mL正已烷重复操作一次，下层加水10mL稀释，混匀，待净化。

EZsep?HLB固相萃取柱（150mg/6mL，货号：PZ12603）依次用5mL甲醇、5mL水活化后，取待净化液上样，上样结束后依次用3mL水、2mL5%甲醇水溶液淋洗萃取柱，再用10mL甲醇洗脱萃取柱，收集洗脱液于30℃氮吹浓缩至近干，用流动相定容至1mL，混匀，用PTFE微孔滤膜过滤，高效液相色谱测定。

1.4 LC分析

色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）

柱温：40℃

流动相：A：2%乙酸溶液 B：乙腈 C:甲醇

流速：0.6mL/min

检测波长：270nm

进样量：50μL

表1 流动相梯度表

表2 加标回收率结果

图1 1.0μg/mL混标色谱图

图2 空白样品色谱图

图3 样品加标色谱图

本实验使用EZsep?HLB固相萃取柱（150mg/6mL，货号：PZ12603，北京莱伯帕兹检测科技有限公司）对鱼肉中磺胺类药物净化后进行测定，该方法的加标回收率在76.1%~92.0%之间，RSD在1.0%~4.6%之间。准确性和精密度均满足农业部958号公告-12-2007要求，实验方法稳定、可靠。

[1] 农业部958号公告-12-2007 水产品中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-紫外检测法