动物源食品中的兽药残留超标可能导致人体产生急性或慢性中毒，同时也会使病原体耐药性增强，从而对人类健康构成威胁。因此，做好动物源性食品中兽药残留的检测具有重要意义。氯霉素是一种广谱抗生素，对革兰阳性、阴性菌都有很好的作用，且在脑脊液中浓度较高，也常用于治疗其他药物疗效较差的脑膜炎患者，但氯霉素可引起严重的毒副作用，建立一种高效、准确的检测方法尤为重要。

本实验参照《GB 29688-2013 食品安全国家标准 牛奶中氯霉素残留量的测定 液相色谱串联质谱法》，利用EZsep?C18-U固相萃取柱（500mg/6mL，货号：PZ10705）净化样品，建立了一种牛奶中氯霉素的检测方法，此方法的回收率及平行性良好，适用于牛奶中氯霉素残留量的检测。

关键词：

氯霉素，固相萃取

1.1 仪器与试剂

SPE1000全自动固相萃取系统，北京莱伯泰科仪器股份有限公司；

MVP全自动高通量真空平行浓缩仪，北京莱伯泰科仪器股份有限公司；

E.T.氮吹浓缩仪（货号：C020017），北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

液质联用仪SCIEX 4500，SCIEX公司；

甲醇（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

离心机H1850，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；

甲醇（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

正己烷（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

乙酸乙酯（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

氯化钠（分析纯），购自国药集团化学试剂有限公司；

EZsep?C18-U固相萃取柱（500mg/6mL，货号：PZ10705），北京莱伯帕兹检测科技有限公司。

1.2 工作液配制

氯霉素标准储备液：100μg/mL，溶剂为甲醇，购自坛墨质检标准物质中心。

氯霉素-D5标准储备液：100μg/mL，溶剂为甲醇，购自坛墨质检标准物质中心。

标准中间液：移取氯霉素储备液和氯霉素-D5标准储备液各100μL，分别用甲醇稀释至10mL容量瓶中，配制成浓度均为1.0μg/mL的氯霉素标准中间液和氯霉素-D5同位素标准中间液。

标准使用液：移取氯霉素中间液和氯霉素-D5标准中间液各1mL，分别用甲醇稀释至10mL容量瓶中，配制成浓度均为0.1μg/mL的氯霉素标准使用液及氯霉素-D5同位素标准使用液。

移取0.1μg/mL的氯霉素标准使用液0、0.01、0.05、0.10、0.20、0.50mL分别置于10mL容量瓶中，并均加入氯霉素-D5同位素标准使用液0.2mL，以纯水定容至刻度，得到氯霉素浓度依次为0μg/L、0.1μg/L、0.5μg/L、1μg/L、2μg/L、5μg/L，氯霉素-D5浓度固定为2μg/L的系列标准溶液。

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

称取10.0g牛奶样品，加入氯霉素标准使用液10μL、氯霉素-D5同位素标准使用液200μL，加入20mL乙酸乙酯，振荡15min，6000r/min离心10min，取上清液于收集杯中，复提一次合并上清液，置于MVP全自动高通量真空平行浓缩仪上，按温度40℃、转速150r/min、真空度200mbar减压旋蒸至近干，用5mL4%的氯化钠水溶液溶解残渣，加入5mL正己烷，振荡1min，静置分层，弃去正己烷，再加入正己烷5mL，重复提取一次，取下层液，待净化。

1.3.2 固相萃取净化

用5mL甲醇、5mL水活化EZsep?C18-U固相萃取柱（500mg/6mL，货号：PZ10705），取1.3.1待净化液上样，上样结束后用5mL水淋洗固相萃取小柱，再用氮气吹干萃取柱2min，以5mL甲醇洗脱并收集洗脱液，洗脱液经E.T.氮吹浓缩仪在40℃氮气浓缩至近干，再用1.0mL40%乙腈水溶液重新溶解，过0.22μm微孔滤膜，供LC-MS/MS测定。

1.3.3 LC-MS/MS测定条件

色谱柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；

柱温：40℃；

进样量：5μL；

离子源参数：

IS电压：5500V；

离子源温度TEM：600℃；

检测方式：多反应监测（MRM）

流动相：乙腈：水=40：60；

流速：0.20mL/min。

表1 加标回收率

图1 氯霉素标准色谱

图2 牛奶样品加标色谱图

本实验使用EZsep?C18-U固相萃取柱（500mg/6mL，货号：PZ10705）对牛奶中氯霉素进行净化后通过LC-MS/MS测定，该方法的加标回收率在97.6%~105.2%之间，RSD为3.0%，准确性和精密度均满足《GB 29688-2013 食品安全国家标准 牛奶中氯霉素残留量的测定 液相色谱串联质谱法》要求，实验方法准确、可靠。

[1] GB 29688-2013 食品安全国家标准 牛奶中氯霉素残留量的测定 液相色谱串联质谱法