抗体选得快,结果出的早!
当你决定要买一支抗体,是否问过自己以下问题:我要买哪个牌子?靶标和种属是什么?克隆类型是什么?宿主是什么?标记物是什么?要用于哪些实验?
这些基本条件清晰明了,才能选到合适的抗体,早日得到完美的实验结果哦。
那么今天我们就来一起走一遍完整的抗体选择流程吧~
一抗检索
第一步:如何查找一抗
直接登录赛默飞官网主页,工具框选择“一抗”
www.thermofisher.cn/cn/zh/home
第二步:充分利用检索工具
可输入靶标名称/基因类型/抗原名称(Target, gene symbol, antigen)
第三步:选择具体的实验应用(Application),例如WB/IF/IHC/ICC/ELISA/FACS等。
Tips:不同的实验对抗体的要求是不同的,一种抗体也有可能适用于多种用途。例如适用于Western Blot(WB)的抗体多数也适用于Dot blot、免疫组化(IHC)实验,因为都是用来检测变性的线性抗原;适用于ELISA的抗体多数也适用于免疫荧光(IF/ICC)、IP/Co-IP,因为都是用来检测天然构象抗原;然而适用于WB的抗体,不一定适用于IF/IP等实验,因此挑选抗体的时候一定要确认具体的实验用途。
第四步:选择要检测的目标物种(Target Species),例如Human/Mouse/Rat/Rabbit等。
Tips:弄清我们要检测的样品是来源于哪个种属,才能又快又准地拿到理想的结果哦。如果样品来源于human,却选择了针对mouse的抗体,可能会在一次次重复也得不到理想结果的过程中浪费时间精力和经费甚至开始怀疑自己…
第五步:设定好条件,就可以开始跳转到抗体界面啦!
这里有更加精准的筛选条件哦,我们来看看它们都代表了什么吧:
高级验证(Adv.Verification)
Invitrogen抗体经过严格的两步检测方法,确保您的抗体能与正确的靶标结合,在不同的应用发挥最佳性能。验证的方法包括免疫沉淀-质谱联用(IP-MS),敲低/敲减,细胞处理,相对表达等,去报抗体特异性和稳定性。
偶联物(Conjugate)
我们也可以称作“标记物”、“染料”。根据不同实验要求,可以选择未标记一抗(Unconjugated)或直标一抗(荧光染料Alexa Fluor/FITC,生物素Biotin、辣根过氧化物酶HRP、碱性磷酸酶AP等)。
宿主(Host)
宿主是指帮我们生产抗体的物种,例如小鼠(mouse)、大鼠(Rat)、兔子(Rabbit)等,不同host类型,决定后续二抗的选择。例如mouse anti-human一抗,是指借助小鼠生产出来的抗体,用于检测人源样品,那么就要搭配anti-mouse的二抗。此外还需要注意:所用二抗的宿主必须不同于一抗的宿主和目标种属。例如,如果一抗来源于兔,则不能使用来源于兔的二抗。
克隆类型(Clonality)
我们需要的是单克隆抗体(monoclonal)还是多克隆抗体(polyclonal)还是重组抗体(recombinant)呢?单抗更适用于检测单个表位,且批次间一致性高,不同实验间同质性也非常高,然而可能出现特异性过强或表位丢失的现象;多抗则可以识别任一抗原上的多个表位,比单抗更能容许抗原的微小变化,更适用于检测变性蛋白质,不足之处是易产生批次间差异及背景信号。重组抗体源自生成单克隆抗体的细胞系,通过分离及克隆特定抗体的重链和轻链DNA序列而产生。这些单抗不会因细胞系的改变或批次间的改变而受影响,因此可实现极高且稳定的特异性和性能。
克隆号(Clone)
一般是用来标示单克隆抗体的抗原表位的,克隆号一致的抗体,抗原表位时完全相同的,因此在抗原识别的各种特性上都一样。
修饰位点(PTM- post translation modification)
常规的修饰类型有乙酰化(Acetylation)、甲基化(Methylation)、磷酸化(Phosphorylated)等。
激光兼容性(Laser Compatibility)
不同染料的激发波长不同,如果是做荧光染色,需要根据现有设备所支持的波长来选择适合的染料。
新功能上线-抗原序列查询
想看看新买的膜蛋白抗体靶向胞内还是保外?
这个鼠源抗体,能不能也检测猪呢…
或许我们的抗原序列查询功能能帮您。
第二步:选择蛋白靶标
第三步:查看抗原序列,选择合适的抗体。
二抗检索
第一步:如何查找二抗
与查找一抗的方法类似,在检索工具第一格选择“二抗”(secondary antibodies):
第二步:依次选择宿主,靶标种属,偶联物。
Tips: 这里的“Host”是指生产二抗的物种;而这里的“Target Species”要根据一抗的宿主类型进行选择,如上文所说,例如mouse anti-human的一抗,需要匹配的是anti-mouse的二抗。
第三步:设定好条件,就可以开始跳转到抗体界面啦!
这里有更加精准的筛选条件哦,我们来看看它们都代表了什么吧:
靶标类型(Target Class)
如果对一抗的类型有要求,比如IgG/E/D/A/M/Y等,则需要选择这一项。
偶联物(Conjugate)
WB/DB/ELISA,通常选择HRP标记;IF/ICC等一般选择荧光标记,根据激光器的波长选择合适的荧光标记物,Alexa Fluor 488因文献引用最多、最亮最稳定,所以最常用。Alexa Fluor Plus荧光二抗为赛默飞创新型产品,信噪比更高,适合于稀有样本的低丰度靶点检测。
交叉吸附(Cross Absorbed)
如果对背景要求较高,则需要选择交叉吸附过的二抗。
抗体形式(Antibody Form)
如果是对轻链/重链/Fab区有要求,则需要选择这一项。
重组抗体(recombinant)
其采用专门的筛选和生产过程,得到特异性的重组山羊或兔的二抗混合物,可与单克隆抗体表位准确结合,且同时具有多克隆抗体的多表位覆盖(如H+L)和高灵敏度。每一种重组二抗都经过专门的制备和优化,批次间稳定出色,有助于取得绝佳的ELISA、Western blot和细胞成像结果。
最后,就是你啦!
选好了抗体,是不是还期待有活动?巧了,Invitrogen抗体团购促销活动目前还在如火如荼开展,两支即可特享优惠,3支优惠更多,多买多省呢!
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