硝基咪唑类药物是畜禽饲料中常用的抗原虫感染及抗菌药，并有促进生长的作用，但是该药物及其某些代谢物对哺乳动物具有致癌、致畸、致突变作用和遗传毒性，饲料中硝基咪唑类药物的不合理使用造成可食性动物组织中药物残留，以至危害到人类食品安全。

参考《GB 31658.23-2022食品安全国家标准 动物性食品中硝基咪唑类药物残留量的测定》，建立了SPE-UPLC-MS/MS法，可测定猪肉、鸡肉、猪肝中硝基咪唑类药物，本方案使用乙酸乙酯提取，正己烷除脂，ProElut PXC净化，Endeavorsil C18色谱柱分离检测，定量限与标准方法一致，回收率在90%-110%之间。

本方案完全重现了国标方法，灵敏度高，回收率好，能满足客户需求。

本方案适用于猪肉、鸡肉、猪肝中甲硝唑、羟基甲硝唑、地美硝唑和羟基地美硝唑残留量的测定。

(1) 标准储备液：由标准品部提供，浓度100μg/mL，溶于甲醇。(cat.#: 47905)

(2) 混合标准工作液：吸取适量标准储备液，用甲醇稀释定容，配置成浓度为0.1μg/mL的混合标准工作液。

(3) 内标储备液：由标准品部提供，浓度100μg/mL，溶于甲醇。(cat.#: 47972)

(4) 混合内标工作液：吸取适量内标储备液，用甲醇稀释定容，配置成浓度为0.1μg/mL的混合内标工作液。

(1) 称取2g样品，加入混合内标工作液100μL，涡动混匀30s，静止10min；

(2) 加入15mL乙酸乙酯，涡旋2min，10000rpm离心2min，取上清于氮吹管中；

(3) 残渣再用15mL乙酸乙酯提取一次，合并2次提取液，于35℃水浴氮吹至干；

(4) 先用3mL 0.1mol/L盐酸溶液^*溶解残渣，涡旋1min，并转移到15mL离心管中，再用2mL 0.1mol/L盐酸溶液清洗氮吹管，合并两次盐酸溶液；

(5) 向离心管中加5mL正己烷，涡旋1min，6000rpm离心2min，弃去正己烷层，再加入5mL正己烷，重复除脂一次，弃去正己烷层，下层备用。

^*0.1moL/L 盐酸溶液：取浓盐酸8.3mL, 用水稀释至1L, 混匀。

ProElut PXC 60mg/3mL (Cat.#: 68203)

(1)活化：用2mL甲醇和2mL 0.1mol/L盐酸溶液活化；

(2)上样：备用液全部过柱，弃去流出液；

(3)淋洗：依次用2mL 0.1mol/L盐酸溶液，1mL甲醇和1mL 2% 氨水^*淋洗，推干，弃去流出液；

(4)洗脱：加入2mL 洗脱液^**洗脱，并收集洗脱液；

(5)重新溶解：将洗脱液在35℃水浴下氮吹近干(剩余大约0.2mL)，用水定容至0.5mL，混匀，过Nylon膜(Cat.#: 37177)，上机分析。

^*2% 氨水溶液：取2mL氨水，加水稀释至100mL，混匀，现用现配；

^**洗脱液：取80mL甲醇，加水15mL、氨水5mL，混匀，现用现配。

取经提取和净化的空白试料溶液，加入适量混合标准工作液和100μL混合内标工作液，35℃水浴下氮吹近干(剩余大约0.2mL)，用水定容至0.5mL，混匀，过Nylon膜(Cat.#: 37177)，上机分析。

UPLC 条件

色谱柱：Endeavorsil C18, 50×2.1mm,  1.8μm (Cat.#: 87002)

流速：0.3mL/min

进样量：10μL

柱温：35℃

流动相：A:0.1%甲酸水  B:0.1%甲酸乙腈

质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表