本方案适用于果粒橙、葡萄酒、绿豆糕、带馅儿面包、棒棒糖、话梅、果冻、火腿、酱牛肉等食品中柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、喹啉黄、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、亮蓝和赤藓红11种合成着色剂的测定。

(1) 单标储备液1000μg/mL：称取适量合成着色剂单标，用水配制成1000μg/mL的单标储备液。

(2) 混标中间液50μg/mL：分别吸取0.5mL单标储备液1000μg/mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成50μg/mL的混标中间液。

(3) 混标中间液10μg/mL：分别吸取0.1mL单标储备液1000μg/mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成10μg/mL的混标中间液。

3.1 液体类试样（果粒橙、葡萄酒）

(1) 取2.0g样品于50mL具塞离心管中，加入25mL乙醇氨水溶液，振荡1min，5000rpm下离心5min，收集上清液于50mL容量瓶中，并用乙醇氨水溶液定容至50mL，即得提取液；

(2) 准确吸取10mL提取液，50℃水浴下氮气吹至3mL，分2-3次共加入10mL5%甲醇水溶液溶解，待净化。

3.2 固体类试样（绿豆糕、带馅儿面包、棒棒糖、话梅、果冻）

(1) 取2.0g样品于50mL具塞离心管中，加入2mL水，50℃水浴加热混匀样品，加入25mL乙醇氨水溶液，振荡1min，50℃水浴超声提取20min，8000rpm下离心5min，收集上清液于50mL容量瓶中；

(2) 向下层残留物中加入10mL乙醇氨水溶液，按照步骤(1)重复提取一次，合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL；

(3) 准确吸取10mL提取液，50℃水浴下氮气吹至3mL，分2-3次共加入10mL5%甲醇水溶液溶解，待净化。

3.3 含油量较大的试样（火腿、酱牛肉）

(1) 取2.0g样品于50mL具塞离心管中，加入20mL石油醚，振荡1min，超声提取10min，8000rpm离心5min，弃去上清液，加入25mL乙醇氨水溶液，振荡1min，50℃水浴超声提取20min，8000rpm下离心5min，收集上清液于50mL容量瓶中；

(2) 向下层残留物中加入10mL乙醇氨水溶液，按照步骤(1)重复提取一次，合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL；

(3) 准确吸取10mL提取液，50℃水浴下氮气吹至3mL，分2-3次共加入10mL 5%甲醇水溶液溶解，待净化。

乙醇氨水溶液：700mL无水乙醇，4mL氨水，用水定容至1000mL。

提取液浓缩时间控制在40-50min之间，不宜过长。

ProElut^? PWA-2 150mg/6mL（Cat.#:65815）

(1)活化：依次加入6mL甲醇、6mL水，流出液弃去；

(2)上样：将待净化液加入柱中，控制流速2s/滴，弃去流出液；

(3)淋洗：依次加入6mL 2%甲酸水溶液、6mL甲醇，控制流速约2s/滴，弃去淋洗液，真空抽干2min(或不抽干)；

(4)洗脱：分两次加入6mL 2%氨水甲醇溶液，每次3mL，控制流速约3s/滴，收集洗脱液；

(5)重新溶解：将洗脱液在50℃水浴下氮气吹至约0.5mL，用乙酸铵(20mM,pH9.0)定容至2mL，涡旋混匀，用0.45μm亲水PTFE滤膜过滤，弃去5滴初滤液，取续滤液上机分析。

仪器：LC-2040C

色谱柱：Diamonsil C18(2) 250×4.6mm，5μm（Cat.#：99603）

流速：1.0mL/min   

进样量：10μL

柱温：30℃

检测器：PDA 400-800nm

流动相：A:甲醇 B:0.02mol/L 乙酸铵溶液

梯度设置

食品中人工合成着色剂的HPLC检测的添加回收结果。

添加浓度30mg/kg(加标量:50μg/mL,1.2mL)

添加浓度1.5mg/kg(加标量:10μg/mL,0.3mL)

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