维生素D有两种存在形式维生素D3和维生素D2。皮肤中的7-脱氢胆甾醇受到光照后，转化成维生素D3，另有一小部分维生素D3可通过食用动物性食品而直接摄入。维生素D2不能由机体自主合成，但可通过对一些植物性或菌类食物的摄取来补充。维生素D是一种营养素，在体内主要存在形式为25羟基维生素D，所有直接检测维生素D并不能很好的反映人的真实状态。

血清中25(OH)D有三种存在形式，与维生素D结合蛋白结合，与白蛋白结合及游离状态。研究发现，游离的25(OH)D可能是评估维生素D水平更好的指标，游离25OHD与骨骼健康的相关性优于总25(OH)D。但游离状态的VD仅占总VD的不到0.03%，含量非常低。

由于游离25(OH)D在体内含量极低，检测时还需分离C3位的差向异构体，对检测方法的灵敏度要求高。

北京协和医院检验科于2020年发表的文章显示 ，基于 6500+质谱系统建立的快速检测血清中24,25(OH)2D2, 24,25(OH)2D3, 25(OH)D2, 和 25(OH)D3水平的LC-MS/MS方法，能够有效分离非活性的C3差向异构体。实验者对老年人样本进行统计学分析，比较了游离25(OH)D与总25(OH)D在肝、肾功能的相关性，在特殊人群中游离25(OH)D是维生素D营养状况的可靠标志，比如肝硬化患者（文献4）。

1,25(OH)2D在体内受到多重因子的严格调控。不过也会存在一些疾病扰乱维生素D 代谢产生1,25(OH)2D，致使1,25(OH)2D的浓度超出正常范围。如1α羟化酶缺乏症。所以检测1，25(OH)2D也能判定这些疾病。

血清中1,25(OH)2D含量很低（通常在15~60pg/mL）且受甲状旁腺激素、钙和磷调节的影响。免疫分析方法不能区分1,25(OH)2D2和1,25(OH)2D3，容易受到异构体、维生素D结合蛋白的影响。传统的LC-MS/MS方法需要繁琐的样品前处理程序，如免疫亲和萃取、固相萃取或衍生化等。(文献2、3)

北京协和医院检验科于2016年发表的文章显示，基于 6500+质谱系统上建立的快速检测血清中1,25(OH)2D2和1,25(OH)2D3水平的LC-MS/MS方法，检测2174例样本后发现1,25(OH)2D2和25(OH)D2检出率很低，这很可能是免疫法检测有差异的原因之一。（文献1）

图2. (a)空白血清中1,25(OH)2D2(左图)，1,25(OH)2D3(中图)和1,25(OH)2D3-d3(右图)的色谱图，(b)空白血清中添加10pg/mL 1,25(OH)2D2和1,25(OH)2D3 (c)临床样品

悉尼大学澳新军团研究所于2021年发表的文章显示，基于 6500 QTRAP质谱系统上建立的13种维生素D的检测方法，较高的1,25(OH)2D3浓度与增加的骨转换和较差的骨骼健康有关。在肾小球疾病患者中，1,25(OH)2D3与肾功能下降有关，而25(OH)D没有差异。

有研究表明，25(OH) D/24,25(OH)2D比值是维生素D分解代谢的明确标志物，称为维生素D代谢比率(VMR)，该比值的升高可作为预测维生素D的补充效果，还可用来鉴别CYP24A1突变继发性高钙血症患者，如特发性婴儿高钙血症等。

目前尚无免疫学方法检测。24,25(OH)2D在血清中浓度较低，且23,25(OH)2D和4,25(OH)2D对其存在干扰较难分离，对于LC-MS/MS方法检测有很大挑战。

北京协和医院检验科在2022年发表的文章显示，基于 6500+质谱平台建立的快速简便的液相色谱串联质谱法测定人血清中维生素D及其代谢物，该方法能够分离C3位的差向异构体、23R,25(OH)2D2和4β,25(OH)2D。(文献5)

比利时的列日大学临床化学系和巴黎的奈克尔医院儿童疾病开发实验室在2017年发表的文章显示，基于QTRAP 6500质谱平台建立的快速检测25(OH)D、24,25(OH)2D的LC-MS/MS方法，发现VMR的检测对特殊人群维生素D缺乏症的评估有重要意义，比如血液透析患者的VMR非常低，同时也证明了VMR对于预测CYP24A1突变引起的高钙很有意义。（文献6）

图3. 维生素D相关代谢物检测色谱图

维生素D的25(OH)VD检测最为普遍，但其他的多个代谢物在不同的疾病中也有临床意义，其检测难度也是之前关注少的原因。我们非常高兴质谱能协助完成这些之前看来不可能完成的任务。希望简单、快速、可重复和高灵敏度的质谱精准定量检测技术，能助力行业解决更多的维生素D及其代谢物的临床检测需求，真正让质谱改变每个人的生活！

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