应用分享｜采用TSKgel G3000SW色谱柱测定人促红素中二聚体及高分子量物质
促红细胞生成素（EPO）又称红细胞刺激因子、促红素，是一种人体内源性糖蛋白激素，可刺激红细胞生成。临床上多用于治疗肾功能不全合并的贫血、获得性免疫缺陷综合征/艾滋病本身或治疗引起的贫血、恶性肿瘤伴发的贫血及风湿病贫血等多种贫血。
本应用中作者采用了TSKgel G3000SW尺寸排阻色谱柱建立了测定人促红素二聚体及高分子量物质含量的方法。
色谱柱：TSKgel G3000SW（7.8 mmI.D.×60 cm）
流动相：磷酸盐缓冲液（磷酸二氢钾0.2 g、无水磷酸氢二钠1.2 g和氯化钠23.5 g，加水溶解稀释成1 L，pH 7.4）
流速：0.5 mL/min
进样体积：50 μL
柱温：30℃
检测器参数：UV@214 nm
1) 供试品溶液：取供试品，按照供试品的蛋白含量，用流动相稀释成含蛋白0.4 mg/ml的溶液，混匀，作为供试品溶液。
2) 分离度溶液：取EPO-SEC CRS欧洲标准品1瓶（蛋白含量100 μg），精密加入250 μL流动相，用流动相溶解并稀释制成0.4 mg/mL溶液，作为分离度溶液。
3) 对照品溶液：精密量取分离度溶液20 μL，加980 μL流动相稀释成0.008 mg/ml溶液，混匀，作为对照品溶液。
图1 HPLC图
(A) 空白溶液；(B) EPO分离度溶液
采用TSKgel G3000SW色谱柱参照《英国药典》和《欧洲药典》的方法，建立测定人促红素中二聚体和高分子量物质含量的方法，分析谱图见图1。结果显示：单体峰的保留时间约为30~35 min。分离度溶液中二聚体与单体峰之间的分离度均大于1.5。以信噪比S/N ≥ 3为检测限，单体峰浓度检测限为：0.002 mg/mL。
该方法专属性强，灵敏度高，可为人促红素原液及注射剂中二聚体和高分子量物质的质量控制提供参考。
参考文献
1. 唐娜，贾丽华，宋莉，陈统华，苏超男，王嫦鹤，人促红素中二聚体及高分子量物质的质量研究 中国医药科学. 2023,13(11)：75-812
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