顺磁小课堂52期 | 对于具有顺磁性中心的蛋白质或进行了自旋标记的蛋白质，可否用顺磁共振技术进行测试？
顺磁小课堂（第52期）
作为波谱学的重要分支，电子自旋的直接表征工具，电子顺磁共振波谱学具有不可替代的重要作用。部分初学者常面临基本原理不清、谱图解析困难、仪器操作不熟练等问题。
为帮助大家更好地运用电子顺磁共振波谱技术，国仪量子携手清华大学磁共振实验室推出“顺磁小课堂”栏目，一一解答大家在学习、实验中遇到的问题。
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01
判断题：核磁共振是测试蛋白质结构的主要手段之一，对于具有顺磁性中心的蛋白质，或者进行了自旋标记的蛋白质，可否用顺磁共振技术进行测试。
A. 是
B. 否
答：A
EPR技术的检测对象是至少含有一个未成对电子的物质，因此EPR技术可以检测含有顺磁性金属离子的金属蛋白，或用自旋探针标记过的蛋白质，而不能直接检测所有蛋白质的结构。
02
多选题：影响EPR测试定量准确性的因素有哪些？
A. 实验参数的设置
B. 样品的材料（介电常数）
C. 样品的尺寸和形状
D. 样品的放置位置和方向
E. 数据处理（基线选取、基线拟合等操作）
答：ABCDE
影响EPR测试定量准确性的误差来源见下图。
03
判断题：捕获剂BMPO与羟基自由基的结合能力强于DMPO与羟基自由基的结合能力。是否在用EPR技术检测羟基自由基时，应优先选择BMPO作为捕获剂？
A. 是
B. 否
答：B
在水体系中，BMPO可以同时检测羟基自由基和超氧阴离子，二者信号无法区分。因此在用EPR技术检测羟基自由基时，应具体情况具体分析，并非BMPO是最佳的捕获剂选择。
04
判断题：在进行自旋捕获时，捕获剂应该在反应开始之前加入。
A. 是
B. 否
C. 具体情况具体分析
答：C
通常情况下，在捕获短寿命自由基时，由于捕获剂寿命过短，捕获剂应在光照之前、反应之前加入。但有些捕获剂（如DMPO）也是自由基诱导剂，具有诱导产生自由基的作用。所以建议在正式测试之前，先进行空白对照实验，确定捕获剂对体系产生自由基的影响，因此需要具体问题具体分析。
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供稿：
清华大学 杨海军 李勇 李文郁
国仪量子 石致富 陈阳 范莹莹
审核：杨海军
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