海能实验室

1、将滤膜编号，于105℃烘箱中烘干至恒重并称重为M_G后，安装于过滤漏斗中，并安装至仪器相应位置处。

2、移取350 μLl的热稳定淀粉酶溶液，溶于盛有50 mL的顺丁烯二酸缓冲液的酶瓶中；移取3.5 mL的10 mg/mL蛋白酶溶液，溶于盛有47 mL的顺丁烯二酸缓冲液的酶瓶中；移取700 μL的葡萄糖苷酶溶液，溶解于盛有50 mL的顺丁烯二酸缓冲液的酶瓶中，然后将酶瓶安装至仪器相应位置处。

3、将酶解袋装于仪器相应位置处。

4、确保95%乙醇、纯水、顺丁烯二酸缓冲液、醋酸溶液的对应试剂桶中试剂充足，然后将其与对应接头连接。

本方案采用SOX606索氏提取仪进行样品的脱脂处理。

精确称取混匀后的样品10~12 g（精确至0.1 mg）左右，记为M_C。将称好的样品转移至滤纸筒中。将盛有样品的滤纸筒置于仪器萃取室内，向溶剂杯中加入沸程30~60℃的石油醚，仪器参数设置如下：

抽提完成后，将残渣烘干至恒重，记为m_D。

1、设定酶解程序如下：

2、在运行-第一法中选定设定酶解程序，开始运行，并按照步骤将酶解袋安装至仪器对应位置处，然后按照步骤提示将样品倒入酶解袋中。（注意避免样品粘在酶解袋内壁高于上压条的未知，否则应用带针头的注射器吸取缓冲液将样品冲入酶解袋，冲洗体积不超过两毫升）。

3、仪器自动进行酶解、乙酸溶液添加。然后根据弹窗提示测定（或需添加1 mol/L氢氧化钠溶液或乙酸溶液调整）空白、样品的pH值为4.3±0.2，然后点击下一步。若需测定不可沉降性膳食纤维（SDFS），则需按照提示加入内标物，以进行后续的液相法测试。

4、仪器自动进行沉淀、抽滤，得到滤液与TDF的残渣，将附有残渣的滤纸取出，按照十字折叠后放置于样品架上，在105℃烘箱中烘干至恒重（至少需4小时）并称重为M_GR。

5、每两份残渣中，一份按照国标《GB 5009.5-2016 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》第一法进行消解（推荐试剂量为硫酸铜0.2 g、硫酸钾3 g、硫酸20 mL，420℃下保温时间至少为3小时），蒸馏、滴定，计算蛋白质质量MP；另一份置于马弗炉中，于550℃下灰化3h测定灰分，计算灰分质量M_A。

1、设定酶解程序如下：

2、在运行-第一法中选定设定酶解程序，开始运行，并按照步骤将酶解袋安装至仪器对应位置处，然后按照步骤提示将样品倒入酶解袋中。（注意避免样品粘在酶解袋内壁高于上压条的未知，否则应用带针头的注射器吸取缓冲液将样品冲入酶解袋，冲洗体积不超过两毫升）。

3、仪器自动进行酶解、乙酸溶液添加。然后根据弹窗提示测定（或需添加1mol/L氢氧化钠溶液或乙酸溶液调整）空白、样品的pH值为4.3±0.2，然后点击下一步。若需测定不可沉降性膳食纤维（SDFS），则需按照提示加入内标物，以进行后续的液相法测试。

4、仪器自动进行抽滤，得到滤液与ISDF的残渣，将附有残渣的滤纸取出，按照十字折叠后放置于样品架上，在105℃烘箱中烘干至恒重（至少需4小时）并称重为M_GR。

5、将过滤漏斗的外斗装回仪器对应位置，点击下一步，仪器自动加入95%乙醇进行沉淀。

6、沉淀完成后，在仪器上换装另一套装有恒重好的滤膜的漏斗及烧瓶，将沉淀好的溶液摇匀并倒入新的漏斗中抽滤。抽滤完成后，按照十字折叠后放置于样品架上，在105℃烘箱中烘干至恒重（至少需4小时）并称重为M_GR。

7、每两份残渣中，一份按照国标《GB 5009.5-2016 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》第一法进行消解（推荐试剂量为硫酸铜0.2 g、硫酸钾3 g、硫酸20 mL，420℃下保温时间至少为3小时），蒸馏、滴定，计算蛋白质质量MP；另一份置于马弗炉中，于550℃下灰化3h测定灰分，计算灰分质量M_A。

实验选取的大豆膳食纤维粉样品经酶解、抽滤、烘干恒重、测定蛋白和灰分后，得到实验结果如下表所示，其中不可溶性膳食纤维（ISDF）的结果如下：

可溶性膳食纤维（SDF）含量如下表：

总膳食纤维（TDF）为ISDF与SDF的加和，测得该大豆膳食纤维粉的总膳食纤维含量为71.090%。  

大豆膳食纤维粉可部分残留于称量纸上，必要时可用不超过2 mL缓冲溶液冲洗，洗液一并转移至酶解袋中。