你遇到过这样的电泳条带吗
在做pcr的时候,都知道实验要避免产生污染,污染大致分五种:(1)临床样本中存在的大量待测微生物;(2)科研中得到的质粒克隆;(3)以前分析研究的特定微生物;(4)大量存在于实验环境中的特定微生物;(5)以前扩增产物的残留污染。
而基因扩增实验室又要分试剂准备区、样本准备区、PCR扩增区、产物分析区等,必需备有各自必需的仪器设、工作服、手套、加样器和通风系统。在每个区使用的试剂和废物,必需直接在其各自的区域内分装或包装。操作人员也必需注意防止通过他们的头发、眼睛和衣服将扩增产物从污染区携带至清洁区的可能性。而实验外的时间需开门通风。
实验操作上,试剂要提前分装:mixer尽量分装,不能原瓶多次取用;引物与探针稀释到一定浓度后分装,保证有备份,以防一管污染之后全军覆没;水需要使用**质量的去离子水,可以从试剂公司购买专用水;加样时动作要小心轻柔,防止将靶序列吸入加样器内或溅出离心管外;加样顺序是Z后加模板。除了酶及其他不耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及进样*头均应一次性使用。必要时,在加标本前,反应管和试剂用紫外线照射,以破坏存在的核酸。
然而,即使你严格遵守了污染FZ的工作程序,但依然出现了你Z害怕的结果。这种电泳条带你面熟吗?
众所周知,酵母双杂文库构建的实验比较好操作,大部分研究生们都能看着说明书进行操作,那为什么PCR外包公司接实验,这种基础的实验确数量却Z多呢?
大多数人实验失败了以后不气馁,一次又一次的重复,然后一一排查,劳心劳累费时费力,有时还是找不到原因,简直要崩溃。却完全不知道自己究竟哪一步出了问题,这里就要给大家普及一个关键词“核酸气溶胶污染”。
离心机离心/剧烈地摇动反应管/PCR开盖/吸样时及移液器的反复吸样等等,会产生空气与液体表面摩擦的,都会产生核酸气溶胶,也就是实验室里(或移液枪内)弥漫着含有长短不一核酸片段的小水珠或小颗粒,这些小颗粒沉降(打到)到空白样中导致Z后扩增出了条带。
可想而知,这些核酸小液滴还会落到实验台面/PCR仪/移液枪/*头*盒子等等地方,然而,这些核酸小液滴会日积月累地积聚,这样做实验就会出现问题,比如pcr假阳性。这种污染是高温高压和紫外照射都无法消除核酸的。
所以,我们平常做实验的时候,要选用对人体无害且专门针对污染的清除剂,例如lemniscare的PCR-Cleaner,PCR_ Cleaner 是由AB两瓶试剂组成,主要成分是水、乙氧基化合物等,喷涂擦拭后,可以消除百分之95以上的DNA/RNA的气溶胶污染,无论是平时的保洁,还是实验前后的清洁处理,都需要清除剂才可以防止核酸气溶胶污染的积累。让实验彻底排除环境污染,避免把时间浪费在各种检错上面,把青春和汗水挥洒于真正的科研之中。
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