AccuSizer粒度仪用于USP787蛋白团聚检测
AccuSizer?用于蛋白质配方优化的自动颗粒计数分析,以最大限度低减少聚集并执行USP<787>亚可见颗粒物测试。
关键词:动态光散射;AccuSizer?系统;自动颗粒计数
1
介绍
动态光散射 (DLS) 是确定蛋白质粒径的标准工具,但该方法不提供浓度信息。AccuSizer? 单颗粒光学计数(SPOS) 系统是测定大于 150 nm 的聚集蛋白大小和浓度(以颗粒/mL 为单位)的理想技术。图 1 显示了对单克隆抗体进行热应激前后的 Nicomp? DLS 结果。蓝色的谱图为应力后结果,显示了高分辨率的多峰结果,包括从~150 nm开始的较大聚集峰。AccuSizer 无法检测低至 10 nm 的单体尺寸,但可以提供指示聚集程度的>150 nm颗粒计数的定量数据。在这项研究中,AccuSizer FX Nano 用于研究各种制剂配方稳定剂如何影响 NIST 标准蛋白的最终聚集状态。同时,AccuSizer 粒子计数器也可用于 USP <787> 亚可见颗粒物测试。1
2
材料
使用的蛋白质是 NIST 参考物质 8671,批号 14HB-D-002,NIST mAb,人源化 IgG1k 单克隆抗体。2
使用 35 mW 半导体激光光源 ,APD 检测器在 Nicomp 动态光散射 (DLS) 系统上测量蛋白质的整体大小。蛋白质聚集体(团聚)在配备两个传感器的 AccuSizer FX Nano SIS 系统上测量:
图 1.热应力前后的Nicomp DLS结果(紫色-应力前;蓝色-应力后)
传感器:
LE-400型:0.5 – 400 μm
FX Nano:0.15 – 10 μm。
SIS 进样器可提供低至 100 μL 的精确微量进样,并具有样品回收功能。
iFormulate3(图2)板预装了由美国能源部设计的用于配方开发的配方,用于测试作为配方化学函数的团聚水平。采用多变量实验设计,评估了蛋白质制剂的四个主要变量:pH值、离子强度、缓冲液和稳定剂浓度对团聚的影响。
图 2. iFormulate 板
使用的 iFormulate 板测试了以下变量:
? pH: 5 – 7.6
? 离子强度: 0 – 200 mM NaCl
? trehalose 稳定剂: 0 – 10 %
? 缓冲液浓度: 10 – 50 mM
3
方法论
解冻 NIST mAb 并稀释至 1 mg/mL。 首先将 160 μL 过滤的去离子水加入到 iFormulate 板的每个孔中。接下来,向每个孔中加入 40 μL NIST mAb。将板置于 60°C(略低于蛋白质熔点)的烘箱中 24 小时。使用AccuSizer粒子计数器分析每个孔>0.15 μm(总计)和> 0.53 μm的颗粒计数数据并提交给iFormulate,然后iFormulate进行数据分析和稳定性建模。
4
结果
使用Pareto分析方法处理数据,这是一种正式的技术,当存在许多可能因素应用最后结果的情况下非常有用。Pareto分析给出了变量的排名和变量之间的交互作用。图 3 和图 4 分别显示了 >0.15 μm 和 >0.53 μm 的Pareto分析。颜色表示配方变量对增加颗粒计数的相对重要性,蓝色 = 显著,灰色 = 临界线,红色 = 不太显著。
Pareto对总结果影响
图 3. >0.15 μm 的Pareto影响(总计)
Pareto对MT0.53微米的影响
图 4. >0.53 μm 的Pareto影响(总计)
接下来的结果(如下所示)显示了不同条件下的聚集效应的 3-D 响应面图。这种设计空间的经验视图提供了优化理想配方的功能,用以识别在两个尺寸范围内较多的颗粒计数来获得最小化聚集的配方。图 5 和图 6 显示了在保持缓冲液和 NaCl 浓度恒定的情况下改变 pH 值和稳定剂(trehalose)的结果。
图 5. pH值和稳定剂对>0.15μm颗粒浓度的影响
图 6. pH值和稳定剂对>0.53μm颗粒浓度的影响
图 7 和图 8 显示了在保持缓冲液浓度稳定且 pH 值在 5.91 至 6.3 之间略有变化的情况下,改变 NaCl 和稳定剂(trehalose)浓度的结果。
图 7. NaCl和稳定剂对>0.15μm颗粒浓度的影响
图 8. NaCl 和稳定剂对 >0.53 μm颗粒浓度的影响
然后对这些结果以及此处未显示的其他结果进行编译,以创建图 9 和图 10 所示的最小粒子计数优化图。
总计 x 10^6
图 9.>0.15 μm颗粒浓度最小化图
MT0.53微米 x 10^3
图 10.>0.53 μm颗粒浓度最小化图
5
结论
此处显示的结果表明,最大限度地减少颗粒计数和蛋白质聚集的最佳配方化学成分是:
pH = 6.1 – 6.3
NaCl = 40 – 70 mM
trehalose = 7 – 8%
Buffer = 50 mM
全部评论(0条)
推荐阅读
-
- AccuSizer粒度仪用于USP787蛋白团聚检测
- AccuSizer?用于蛋白质配方优化的自动颗粒计数分析,以最大限度低减少聚集并执行USP\x26lt;787\x26gt;亚可见颗粒物测试。
-
- 超全! 宿主细胞蛋白残留检测的法规要求和检测方法宝典来了!
- 超全! 宿主细胞蛋白残留检测的法规要求和检测方法宝典来了!
-
- 海绵涂抹棒用于李斯特菌、沙门氏菌等病原体微生物检测样本收集
- 深圳美迪科生物由PP聚丙烯塑料材质制成的可脱离手柄+大面积聚氨酯海绵头构成的海绵棉签可用于环境表面及生产环境的大面积涂抹采样,采集到的样本尽快送到实验室进行检测即可。
-
- 手持式ROHS环保检测仪的常见应用领域
- 点击上方蓝字 关注我们 手持ROHS环保检测仪主要用于检测电子产品和电气设备中这些有害物质的含量是否符合欧
-
- 深圳美迪科生物植绒+海绵短款鼻拭子 短鼻拭子用于抗原检测自测
- 深圳美迪科生物短款鼻拭子 短鼻拭子也叫前鼻拭子、抗原鼻拭子等,主要用于采集前鼻部位的样本,采集到的样本可用于检测是否感染新冠病毒、甲流流感、肺炎支原体等常见呼吸道传染病。
-
- 仪景通手持光谱仪在汽车配件检测中的应用
- 手持光谱仪是一种基于光谱分析技术的检测设备,可以用于检测汽车配件的安全性。手持光谱仪具有操作简单、携带方
-
- 前沿应用|低场核磁共振技术在油泥含油率检测中的应用
- 油泥是一类具有资源回收价值的含油固体废物。低场核磁共振作为一种高新技术,一般在2min内完成对油泥含油率的检测,可以对油泥的油回收水平进行快速评估,以及对油泥处理工艺进行实时评价。
-
- 探微知著:微塑料多维检测技术的发展与应用
- 探微知著:微塑料多维检测技术的发展与应用
-
- 粽享端午,粽子专项检测解决方案
- 食安科技粽子质量安全检测解决方案,高效、便利、准确,守护舌尖上的安全!
-
- 盈盛国产质构仪用于膏药贴剥离强度测试
- 盈盛恒泰ENS系列国产质构仪可以用于评估膏药贴的质量、还可以用于研究不同材料、工艺和配方对膏药贴黏附性能的影响,同时,它也可以帮助生产企业控制生产过程中的关键参数,确保产品质量的稳定性。
①本文由医疗器械网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表医疗器械网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:医疗器械网"的所有作品,版权均属于医疗器械网,转载时须经本网同意,并请注明医疗器械网(www.120med.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi
最新话题
最新文章
- 长光辰英完成数千万A轮融资,建立国际水平的生命科学光学工具平台
- 高考必胜 丨 且踏浪起航,乘梦越山海
- 应用 | 影响喷墨打印质量的重要参数 - 润湿性
- 基理动态|贺“2024年大型仪器设备开放共享工作创新培训班”及“2024年河北省高等学校实验室安全培训会”成功举办!
- 前沿应用|低场核磁共振技术在油泥含油率检测中的应用
- 拼手速 | “破卷出新”FBIF2024食品创新展,免费赠票!
- 收藏!超全的水凝胶3D细胞培养全流程干货,一看就懂~
- Need | “你的”科研产品需求,我们来满足!(内含福利)
- 探微知著:微塑料多维检测技术的发展与应用
- 《REMOTE SENS ENVIRON》--基于S185高光谱数据消除冠层光谱土壤背景影响实现叶片叶绿素含量监测
作者榜
参与评论
登录后参与评论