新品速递第2弹 | Cytiva Protein Select填料，让纯化更自然简单
Protein Select 填料现已全面开售，热度持续高涨~详见： 新品速递！ Protein Select填料，小改变大不同。
操作简单：单一条件，标签自裂解，无需酶切；
灵活适配：多种表达系统，多种蛋白分子；
惊喜表现：超高纯度，无标签氨基酸残留，收获天然蛋白！
Protein Select填料让纯化
回归自然，回归简单！
图1： Protein Select填料
Protein Select填料，是一款特异纯化Protein Select标签重组蛋白的亲和层析填料。
Protein Select标签是一种包含36个氨基酸的标签（点击文末“阅读原文”获取序列信息），在使用 Protein Select 填料进行的亲和层析纯化步骤中，蛋白标签发生自我裂解，最终收集获得了无标签氨基酸残留的高纯度天然蛋白（见图2）。
图2： Protein Select填料层析纯化过程图
该填料和标签构成了自裂解的 Protein Select技术！
案例分享： Protein Select 亲和纯化与非亲和纯化方案的比较
图3：平行评估
在这项研究中，我们针对支架蛋白（E.coli，17 kDa，具有热稳性）比较了两种纯化方案：
结 果
1
传统方法AIEX+热处理+HIC
图4：非亲和纯化方案结果
步骤1和步骤2之间应用热沉淀步骤去除杂质，在HIC步骤后洗脱蛋白纯度为95%。为了获得更高的纯度，后续需要额外引入精纯步骤。
2
Protein Select亲和层析填料
图5： Protein Select resin亲和纯化方案结果
经AIEX步骤后，蛋白纯度接近100%。经质谱分析去除标签蛋白分子量吻合，表明最终的目的蛋白无任何标签氨基酸残留（见图6）。
图6：质谱分析结果
结论-两种方法的比较
AIEX+热处理+HIC | Protein Select 填料+AIEX | |
便捷性 | HIC层析工艺开发需要广泛的筛选和优化需要增加非层析步骤 (热处理) | 不需要优化亲和层析 不需要筛选缓冲液 |
时间 | 当在第一步中使用 Protein Select 填料时，整体速度提高了两倍 | |
纯度 | 95% | 100% |
Protein Select填料
实际操作建议
01
Protein Select标签序列：使用 Protein Select填料，首要需构建含有 Protein Select 标签的表达载体（点击文末“阅读原文”获取序列信息）。
02
影响标签裂解速率的主要因素：目的蛋白N端的1-3个氨基酸。
图7： Protein Select标签自裂解位点
氨基酸性质 | 影响 |
疏水性和芳香族氨基酸 | 位于第二位置有助于增加裂解速率 |
小的非极性或带负电荷的氨基酸 | 位于第一位置将减慢裂解速率 |
脯氨酸 | 位于第一和/或第二位置将停止裂解因此，我们建议您对脯氨酸进行点突变 |
03
Protein Select标签蛋白适用的表达体系，已经测试过的表达体系：
Mammalian (HEK, CHO)
E.coli
04
保持（暂停流速）步骤取决于目的蛋白。推荐4小时保持步骤，也可以进行过夜保持步骤。该过程可以在室温或冷室内进行，保持时间依据目的蛋白而定。
05
缓冲液的选择。单一缓冲液，即可在完整纯化实验中应用。推荐的缓冲液有：
MES (pH 6.0 – 6.5)
Phosphate (pH 6.5 – 7.5)
Tris (pH 7.5 – 9.0)
建议使用20至50 mM的缓冲液，含有最高至1 M的盐 (NaCl) ，pH范围为6-9。
06
Protein Select填料的兼容性。 Protein Select填料耐受常用的水性溶液及添加剂，短期曝露在含有尿素和盐酸胍的NaOH中也是稳定的。
07
Protein Select填料CIP条件
4 M尿素，0.1 M NaOH
4 M盐酸胍，0.1M NaOH
单独尿素、盐酸胍或NaOH的CIP效果不充分，且不可超过推荐浓度。
08
额外增加信号肽或标签。可根据实际需求，额外增加信号肽或标签 (eg. 6×His, FLAG)，推荐去除 Protein Select标签序列其实的甲硫氨酸（ATG密码子）。
图8：额外增加信号肽或标签
09
产品包装规格，目前在售：
HiTrap Protein Select预装柱：1 mL，5 mL
Protein Select填料：25 mL，100 mL，500 mL
10
Protein Select填料产品后续上线
大规格 Protein Select 填料：1 L，5 L，10 L
RSF文件 (Regulatory Support Files)
配基脱落检测试剂盒
小 结
Protein Select填料，简化了蛋白纯化流程，提高了蛋白纯化效率，以简单的方法获得天然的蛋白。
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