文献解读｜NK-92细胞扩增和冷冻保存临床应用
NK-92细胞系是一种人类IL-2依赖性NK细胞系，由一名被诊断患有非霍奇金淋巴瘤的50岁男性的外周血单核细胞 (PBMC) 建立。NK-92细胞的特征是CD56 bright和CD2+，但不存在CD3、CD8和CD16。此外，NK-92细胞表达高水平的穿孔素和颗粒酶B。它们具有全面的细胞毒性范围：
对血液恶性肿瘤和源自实体瘤的细胞系具有活性；
对癌症靶点具有持续且高的细胞毒性。
NK-92细胞已经经历了广泛的临床前开发，并已在癌症患者中完成了I期试验。NK-92系列也已被注入终末期癌症患者，显示出临床益处且不良事件很少。NK-92细胞系在补充IL-2的条件下离体扩增，包含可冷冻保存以进行长期储存的同种细胞群。
NK-92工作细胞库的冷冻保存可以帮助克服与维持持续生长的新鲜细胞培养物相关的困难，立即满足患者随时的给药需求，因此是一个需要克服的重要技术挑战。冷冻保存可以引入规模经济，降低治疗成本，并允许灵活安排患者时间。
文献解读
2024年2月23日联合韩国DAA BIO THERAPEUTIC提出了一种有效的NK-92细胞扩增和冷冻保存方法，用于临床研究和产业化。使用的Xuri W25生物反应器和Via Freeze程序降温仪、培养基和细胞冻存液，展示了用于扩增和冷冻保存NK-92细胞的可放大的工作流程。除了自动化和功能性密闭系统之外，还验证了基因工程NK-92细胞的出色培养动力学。
在使用不含DMSO的STEM CELL BANKER-DMSO free或CryoStor CS10的细胞冻存液，以-1.0°C/min的降温速度并用Xuri T细胞扩增培养基复苏时，观察到NK92细胞的有最佳存活率。
同时也对细胞的复苏后的杀伤功能做了检测。结果显示，E:T比率为0.5:1时增加了60%，E:T比率最高时增加了80%。CD107a显示出77-78%的一致范围，这似乎并不依赖于E:T比率。相反，穿孔素、颗粒酶B和TNF-α的表达水平似乎受到E:T比率的影响，随着比率的增加，观察到更高的水平。
值得注意的是，这些分子即使在0.5:1的比例下也以很高的浓度存在。NK-92细胞的总体细胞毒性在4小时时为20-35%，在16小时时为40-80%（E:T比例为1:1）。5小时时CD107a+NK-92细胞的表达水平为40-60%
随后也对CD16-NK92或TCR-NK92在Xuri-W25上的2 L和10 L培养袋放大培养做了研究。相比于传统静态培养需要21天, 在2 LXuri细胞培养袋中仅需14~15天就能扩增100倍。而在10 LXuri细胞培养袋中根据条件的不同，仅需8~11天就能使细胞扩增100倍。
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