KTA系统与不同检测器联用的选择与应用
在下游纯化工艺层析步骤中,面对不同的生物样品类型,除了常见的紫外监测器外,可以根据被分离样品的不同特性或是独有的性质,选择串联其它监测器用于目的样品与杂质之间的分别检出。
下游纯化中常用的检测器类型
1
紫外监测器 (UV) :利用朗伯比尔定律,被检测样品具有紫外-可见光吸收特性,一般选用被检测样品最大吸收波长处进行监测,以获得最大的灵敏度和抗干扰能力。例如在进行蛋白分离时,可使用280 nm波长对蛋白组分进行测定,又或是同时使用280&260 nm波长测定蛋白、核酸、及蛋白核酸混合物等。
2
荧光检测器(Fluorescence Detector, FD或FLD),可用于检测本身能发射或衍生化后能产生荧光的化合物,被检测样品受到紫外光激发后,发射出比激发光波长更长的光,称为荧光或发射光,常用于带有荧光标签的重组蛋白组分的检测。
3
动态光散射 (Dynamic Light Scattering, DLS) ,由于样品中颗粒布朗运动而产生的散射光的波动随时间的变化,其中小颗粒造成的散射光信号波动速度较快,大颗粒造成的散射光信号波动较慢。光电检测器将散射光信号转化为电流信号,再通过数字相关器的运算处理,得到颗粒在溶液中扩散的速度信息,再通过 Stockes-Einstein方程可以得到粒径分布、颗粒大小等信息。常用于蛋白质、脂质体、病毒等生物分子尺寸分布的测量。
4
多角度激光光散射检测器 (Multi-Angle Laser Light Scattering, MALS),光散射检测器利用激光照射样品后会向各个角度产生散射光的特性,通过收集散射光强度可以判断样品分子形状及大小,通常与SEC尺寸排阻层析一起使用,用于分辨出被测样品的具体状态及占比。
5
示差折光检测器 (Refractive Index Detector, RID) ,是一种通用型浓度检测器,对所有溶质都有响应。光从一种介质进入另一种介质时,由于光在两种介质中折射率不同,将会产生折射,基于连续测定样品流路和参比流路之间折射率的变化从而测定样品含量。适合于一些无紫外吸收的化合物的检测,例如高分子化合物、寡糖类、脂肪烷烃等。
直播预告
层析设备支持哪些检测器?
如何在软件中设置使用连接的检测器?
如何在控制软件中利用多个检测器读值实现层析自动化运行?
本次?KTA CLUB Webinar将会介绍可与?KTA层析系统串联使用的各种外接检测器,如何根据实验样品需求选择外接检测器,如何配置,软件相关操作等,丰富下游纯化过程中的检测手段。
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