流式猴抗 | OMIP-005恒河猴T细胞流式分析
非人类灵长动物在药物研发中都有什么作用？
在创新药研发的过程中，非人类灵长动物具有举足轻重的作用，这是因为非人类灵长动物成为最接近人类的理想实验动物。非人类灵长动物在新药研发中的应用涵盖了临床前研究与临床研究阶段，尤其在临床前研究阶段使用更为广泛。科学家们通过不同的实验方法来评价药物的药理作用，研究其作用机制，以及观察其可能产生的毒性。目前，非人类灵长动物在药物研发中的作用主要有以下几个方面：
疾病模型建立：可以用来建立某些疾病的模型，以便研究人员可以更好地理解疾病的发病机制，并测试新药物的疗效。
安全性评估：可以用来评估新药的毒性和不良反应，以确保药物在人体内的使用是安全的。
药代动力学研究：可以帮助研究人员了解药物在体内的代谢途径、吸收和排泄等方面的信息，从而优化药物的剂量和给药方案。
药效评估：可以用来评估新药物的疗效，了解其对疾病的治疗效果和机制。
OMIPs Collection
OMIP的全称是Optimized Multicolor Immunofluorescence Panels，这是在流式实验研究中的经典多色方案。OMIP是由Wiley杂志下的Cytometry Part A中整理出版的，而Wiley杂志是赛默飞多年保持合作的知名伙伴。OMIP方案的内容包含了免疫基础、流式Panel及画门策略等，帮助了科学家们节省了试验的时间和成本，具有重要的参考价值。
在本期内容中，我们将为您介绍 OMIP-005 恒河猴抗原反应性T细胞流式表型分析 (Quality and Phenotype of Antigen-Responsive Rhesus Macaque T Cells)。
参考文献：Foulds, K.E., Donaldson, M. and Roederer, M. (2012), OMIP-005: Quality and phenotype of antigen-responsive rhesus macaque T cells+. Cytometry, 81A: 360-361. https://doi.org/10.1002/cyto.a.22008
实验目的和样本类型
在OMIP-005中，基础的8色Panel是在临床前疫苗研究中用来检测恒河猴的活CD4 T细胞和CD8 T细胞产生的IFNγ、IL-2和TNFα。再加3个靶标CD28、CD45RA和CCR7，这个Panel升级为11色，可以评价记忆细胞。这个Panel不仅可以检测冷冻保存的PMBC细胞，也适用于新鲜的PBMC、冷冻的组织和红细胞裂解过的新鲜组织样本。这个8色Panel是在常规流式操作实验步骤中验证过的，差异变量很低。
实验背景
直接检测疫苗后动物的抗原特异性T细胞反应是非常难的，因为产生细胞因子的细胞数量少。流式细胞术方法是使用流式荧光染料来检测细胞因子；即使蛋白表达很弱，流式可以精准检测。因为激活的T细胞在刺激后经常内化CD3，我们使用CD3流式抗体做流式胞内染色，确定实验包含了产生细胞因子的细胞。细胞非特异性结合细胞因子抗体会产生背景影响；为了减少这种影响，我们使用CD69流式抗体和LIVE/DEAD细胞活性试剂盒。这个8色Panel可以充分检测CD4 T细胞和CD8 T细胞产生的细胞因子，在此基础上11色Panel可以再多检测记忆型细胞亚型。在这里，CD28和CCR7流式抗体是使用的；其他细胞表面抗体可以一步染色，因为共刺激抗体不在实验步骤中，且CCR7室温下染色可以很好地区分细胞。
流式Panel
流式画门策略
点击查看大图
图1. 恒河猴PBMC的流式染色和画门举例 (A) T细胞亚群通过连续画门而确定：第一个画的是单细胞，第二个画的是活细胞且SSC低的细胞，第三个画的是CD3+且FSC低的细胞，最后画的是CD8+或CD4+ T细胞。(B) 在每种T细胞亚群上，画出CD69+ 细胞因子阳性的门。(C) 记忆型亚型是通过CD4或CD8 T细胞（灰色）上细胞因子双阳性表达门内（IFNγ+ 或IL-2+或TNFα+画门；蓝色）观察。
还有更多
OMIP-005在这结束，但赛默飞世尔科技仍然带着18,000+种流式抗体、80+种荧光染料以及Attune流式细胞仪，陪伴着您的科学实验发展。
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流式细胞术是重要的细胞分析方法学，赛默飞世尔科技的Gibco、Invitrogen和Thermo Scientific产品品牌可提供从流式仪器到抗体和试剂的流式整体解决方案。其中Invitrogen eBioscience陪伴着每一代流式科学家和技术人员获得成果、共同成长，这些年来我们一起见证以Anti-FoxP3为代表的流式抗体深受喜爱、更多种类的流式荧光染料欣然上市以及现在有着更丰富的产品和工具，满足高校研究院、生物技术公司、药企等从早期基础研究到临床转化和生产等不同阶段的需求，加速生命科学行业的进程发展。
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