目前仍然没有批准的预防性疫苗或治疗药物用于临床HCMV感染，因此需要扩大预防和治疗解决方案，以更充分地控制免疫功能低下个体的HCMV感染。到目前为止，虽然CMV疫苗和化学药物对HCMV有效，但受到化学药物的毒性、耐药性以及血液来源产品缺陷的严重限制。基于单克隆抗体的治疗是一种有效的临床替代方案，具有克服现有药物局限性的优点。

暨南大学生命科学与技术学院廖化新课题组在Microbiology Spectrum上发表文章，报道了从HCMV阳性的健康志愿者血液中分离得到的8个单克隆抗体，其中，抗体PC0012、PC0014、PC0035、PC0037、PC1和PC109结合五聚体和三聚体；抗体PC0031和PC0034仅与CMV五聚体结合，而不与三聚体结合。

为了验证这些中和抗体与三聚体和五聚体的结合亲和力，研究者选择表面等离子体共振 (SPR) 技术对分离得到的抗体与已知中和抗体MSL-109的结合亲和力进行了比较。

结果表明，PC0012、PC0014和PC0035结合五聚体的亲和力KD分别为2.85×10^?10 M、3.23×10^?10 M和1.83×10^?10 M，结合三聚体的亲和力KD分别为9.38×10^?11 M、1.00×10^?9 M和1.01×10^?10 M。与五聚体的结合亲和力相比MAb MSL-109高出约4-7倍，与三聚体的亲和力比MAb MSL-109高约20-230倍（图1A和B）。

为深入了解MAbs PC0012、PC0014和PC0035识别的抗原表位与已知中和抗体MSL-109的关系，研究人员选用ELISA和Biacore实验进行抗体竞争阻断分析。

然而ELISA实验中，研究者没有发现组1中MAbs与组2中的MAbs竞争结合，反之亦然。

Biacore抗体竞争阻断分析实验中使用人抗体捕获试剂盒将Anti-human Fc固定在CM5芯片表面作为捕获分子，依次检测抗体与HCMV五聚体或三聚体的结合。结果表明，PC0012阻断了PC0014和PC0035与CMV五聚体的结合，而PC0014仅部分阻断，PC0035完全不阻断PC0012与CMV五聚体的结合。PC0014和PC0035没有阻断对方与CMV五聚体的结合（图2）。

中和抗体MAb 9I6识别五聚体特异性位点5并阻断CMV五聚体与细胞表面受体Nrp2的结合。在与CMV五聚体的结合强弱上，PC0034结合亲和力KD为1.05×10^?10，而MAb 9I6与五聚体结合的亲和力略低，仅为4.84×10^?10M。MAb PC0034完全阻断MAb 9I6与CMV Penamer的结合，反之亦然（图3）。

回顾整篇文章，研究者在取得志愿者血液样品后，使用Ficoll-Paque PLUS分离外周血单核细胞 (PBMC) ，通过流式细胞术 (FACS) 和RT-PCR，借助?KTA分离纯化 8个抗体。

使用Biacore表征了这8个单克隆抗体与五聚体、三聚体的结合活性，并且与已知中和抗体MSL-109和9I6的结合活性进行比较以及进行抗体间竞争阻断分析。对于结合五聚体但无中和能力的抗体PC0034，通过纯化共结晶解析了复合物的晶体结构，分析互作的关键位点，使用Biacore验证了关键位点对于相互作用的影响。

总的来说，在抗体活性表征，竞争阻断分析，关键结合位点分析中，Biacore均提供了核心数据。

Neutralization Epitopes in Trimer and Pentamer Complexes Recognized by Potent Cytomegalovirus-Neutralizing Human Monoclonal Antibodies.

Microbiol Spectr. 2022 Dec 21;10(6):e0139322.