GB 5009.35-2023 《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》实施以来，推出了Copure? PWAX混合型弱阴离子交换柱专用柱，为广大客户解决了在着色剂检测上遇到的问题，备受客户好评。
根据老师反馈，在测试茶叶中的合成着色剂时，采用GB 5009.35-2023的方法测试时，容易出现堵柱子，回收率不好的情况等，鉴于此，采用Copure? PWAX混合型弱阴离子交换柱专用柱和CommaSil? C18色谱柱开发了茶叶基质中的合成着色剂的测试方法。

1.1样品提取
取1.0 g（精确至0.001 g）样品于50 mL离心管中，加入25 mL50%乙醇水溶液，涡旋20min，10000rpm离心2 min，将上清液转移至50 mL离心管中，再加入10mL 50%乙醇水溶液重复提取两次，离心。合并三次提取液，用50%乙醇水溶液定容至50 mL，8000rpm离心5 min，准确移取10 mL上清液于另一50 mL离心管中，加入2 mL甲酸，混匀，待净化。
1.2试样的净化浓缩
先依次用6 mL甲醇和6 mL10%甲酸水活化Copure? PWAX混合型弱阴离子交换柱专用柱（货号：COPWAX6150,150 mg/6 mL,），流出液弃去。保持柱体湿润，将待净化液注入柱中，控制流出液流速在1滴/秒，弃去流出液。再依次用6 mL水和6 mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱。最后用6 mL 15%氨化甲醇洗脱，收集洗脱液于15 mL离心管中，于50 ℃下氮吹至近干（200μL左右）。用20mM乙酸铵-甲醇溶液(9:1，pH=9.0)定容至1 mL，涡旋5min，超声溶解5min（保证充分溶解），10000rpm离心5min，过亲水PTFE滤膜，上机分析。

1.3空白实验
1.3.1过程空白

取一支洁净的50 mL具塞离心管，不称取试样，按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，过膜上机测试。
1.3.2空白本底实验
称取试样1 g（精确至0.001 g）按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，过膜上机测试。

分别精密移取11种着色剂混标中间液（100μg/mL）0.02 mL、0.05mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL于10 mL容量瓶中，用水定容至刻线，摇匀，得标准系列工作液。浓度分别为0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL。

仪器：ThermoFisher U3000液相色谱仪
色谱柱：CommaSil? (4.6 mm×250 mm，5 μm)
流动相：A：20 mmol/L乙酸铵溶液 B：甲醇
洗脱方式：梯度洗脱，见表1
流速：1 mL/min
柱温：30 ℃
进样量：10 μL
检测器：紫外检测器
检测波长：415 nm、520 nm、610 nm

表1 梯度洗脱程序

4.1 加标回收

表2 红茶中11种合成着色剂加标回收率

图1 11种合成着色剂标准溶液（10μg/mL）液相色谱图

图2 红茶本底液相色谱图

图3 加标浓度为1.5mg/kg时红茶中11种合成着色剂液相色谱图

图4 加标浓度为4.5mg/kg时红茶中11种合成着色剂液相色谱图

图5 加标浓度为15 mg/kg时红茶中11种合成着色剂液相色谱图

注意事项：
1.靛蓝标准溶液临用现配。
2.提取次数参考国标，少量多次原则，浓度过大，需要增加提取次数。
3.过柱时，保持柱体湿润，流速不宜过快，控制在1滴/秒。
4.50℃氮气浓缩至近干，过干容易损失目标物，复溶时不易完全溶解。
5.上机之前过滤所用的滤膜不得使用尼龙滤膜，因为尼龙的化学成分是聚酰胺，会吸附合成着色剂，要用亲水PTFE。
6.过滤膜前离心样液，有助于过膜，避免过滤时出现堵的现象。

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